Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований - страница 52

После высушивания мазка на воздухе необходима фиксация. Для этого стекло помещают в сосуд с этанолом или ацетоном (химический способ фиксации) или трижды проводят в пламени спиртовки (физический способ фиксации). Этим достигаются сразу две цели – микроорганизмы погибают и плотно фиксируются на поверхности стекла.

Существуют простые и сложные методы окраски. При простых методах можно использовать только одну краску – водный фуксин (1 – 2 мин) или метиленовый синий (3 – 5 мин). По окончании окрашивания препарат промывают струей воды до тех пор, пока стекающая вода не станет бесцветной, и сушат его на воздухе при комнатной температуре, или осторожно промокая фильтровальной бумагой.

Сложные методы окраски предусматривают последовательное использование нескольких красителей различного химического состава, что позволяет выявить определенные структуры бактериальной клетки.

В живом состоянии микроорганизмы исследуют с целью выявления их формы, подвижности или определения прижизненной внутренней структуры. Изучают нативные и окрашенные препараты, используя методы «раздавленной» или «висячей» капли.

В центре влажного препарата быстро возникает недостаточность кислорода. В сущности именно это помогло Пастеру открыть анаэробный обмен: наблюдая за препаратом, он заметил, что анаэробы сохраняли подвижность только в центре, но не по краям. Подвижные микроорганизмы иногда могут адсорбироваться на стекле; в таких случаях подвижность легче наблюдать в «висячей» капле.

При изучении подвижности микроорганизмов необходимо отличать истинную подвижность от броуновского движения, которое является следствием ударов о бактерии движущихся в растворе молекул и выявляется в виде колебаний. Многие подвижные микроорганизмы движутся очень быстро, что затрудняет наблюдение. Добавляя к суспензии микроорганизмов метилцеллюлозу, можно уменьшить скорость их движения и создать условия, при которых движение жгутиков становится видимым.

В природе микроорганизмы существуют в смешанной популяции. Для изучения свойств микроорганизмов, определения их систематического положения необходимо прежде всего изолировать отдельные виды микробов и вырастить их в виде так называемых «чистых культур», а затем идентифицировать, т. е. установить их соответствие видам, описанным в специальных определителях (схема).

Культивировать микроорганизмы можно лишь при создании определенных условий для их жизнедеятельности. Искусственные условия, которые исключили бы загрязнение культуры другими видами, можно создать в пробирке, колбе или чашке Петри. Вся посуда и питательные среды должны быть простерилизованы и после посева инокулята (микробного материала), защищены от загрязнения извне с помощью пробок или металлических колпачков и крышек.

Посев инокулята является первым этапом исследования. В практической работе для получения «чистых культур» микроорганизмов используют одну из модификаций метода высева на чашки со средой.

Схема

Выделение и идентификация чистых культур аэробных и анаэробных бактерий

Рис. 25. Посев штрихами

Эти методы основаны на том, что отдельные микроорганизмы развиваются на поверхности либо в глубине питательной среды, в которую добавлен агар или какое-нибудь другое гелеобразующее вещество.

Петлю стерилизуют в пламени, остужают и вносят в пробирку с исследуемым материалом. Затем снимают или приоткрывают крышку чашки Петри с питательной средой (рис. 24, см. цв. вклейку) и вносят материал одним из нижеперечисленных способов.