Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований - страница 56

При необходимости осветляют питательную среду, обрабатывая ее белком куриного яйца, сывороткой или путем осаждения. Разливают среду в колбы, флаконы, пробирки. Если среда подлежит стерилизации при температуре 120 °C, используют чистую нестерильную посуду, а если среда требует стерилизации текучим паром (100 °C) или при температуре 112 °C – стерильную. Закрывают посуду со средой ватномарлевыми пробками с бумажными колпачками. В зависимости от состава среды стерилизуют различными способами. Агаровые среды, не содержащие углеводов и нативного белка, а также синтетические среды стерилизуют в автоклаве при температуре 115 – 120 °C в течение 15 – 20 мин. Среды, содержащие углеводы, молоко, желатин, стерилизуют текучим паром (100 °C) дробно или в автоклаве при температуре 112 °C в течение 15 мин. Среды, содержащие нативный белок, мочевину, стерилизуют фильтрованием или добавляют стерильные компоненты (кровь, сыворотку и др.) в стерильную основу среды. Готовые стерильные питательные среды подвергают контролю на стерильность путем выдерживания в термостате при температуре 37 °C в течение 1 – 3 сут.

Можно готовить питательные среды из сухих (консервированных) порошков. Навеску сухой среды, указанную на этикетке, погружают в дистиллированную или водопроводную воду и кипятят до полного растворения порошка. Затем разливают среду в стерильные колбы, пробирки и стерилизуют. Некоторые среды (например, Эндо, Плоскирева, Левина) можно использовать без стерилизации.

Бактериологическому контролю подлежат все питательные среды промышленного производства и все среды, приготовленные в лаборатории. В качестве тест-культур используют типовые или местные штаммы бактерий, типичные по всем признакам, в гладкой форме. Определяют следующие биологические показатели питательной среды: чувствительность (ростовую), ингибирующие свойства, дифференцирующие свойства, скорость роста бактерий на среде, воспроизводимость.

Чувствительность питательной среды устанавливают исходя из минимального количества колониеобразующих единиц (КОЕ) бактерий, обеспечивающих появление роста колоний на среде, или по максимальному десятикратному разведению культуры из исходной концентрации 10 ед. мутности (по оптическому стандарту мутности Государственного контрольного института им. Л. А. Тарасевича), обеспечивающему появление роста бактерий на всех засеянных чашках Петри. Ингибирующие свойства среды оценивают как степень подавления прочей микрофлоры по величине посевной дозы в КОЕ, полностью подавляемой на среде, или по отношению количества выросших колоний бактерий к расчетному количеству посеянных бактерий.

Дифференцирующие свойства сред изучают путем посева испытуемых видов бактерий в смеси с другими видами с последующим определением четкости дифференциации колоний искомых бактерий. Специфичность дифференцирующего свойства среды выявляют по отсутствию этого свойства у прочих видов бактерий. Скорость роста бактерий (в часах) на среде устанавливают по минимальному времени инкубации посевов, в течение которого обеспечивается четкий, видимый невооруженным глазом рост культуры (для селективных сред) или формирование колоний с типичными дифференциальными признаками. Воспроизводимость биологических показателей сред оценивают по частоте одинаковых результатов (%) при повторных использованиях сред с теми же штаммами бактерий. Контроль различных питательных сред по биологическим показателям проводят по конкретным методикам и нормативам, руководствуясь официальными документами.