Методика эксперимента: крысу кладут на предметный столик спинкой вниз, фиксируют передние и задние лапки, а также голову мягкими резиновыми кольцами. Фиксацию головы проводят путем захвата резцов верхней челюсти. Рот свободно открывается с помощью другого резинового кольца, накинутого на нижние резцы животного. Далее экспериментатор с помощью гладилки или другого подходящего инструмента отодвигает щеку и необходимые манипуляции проводит на верхней, а затем на нижней челюсти.
Зубные пасты наносят на зубы экспериментального животного специально изготовленной зубной щеткой или кисточкой из мягкого волоса. Длительность процедуры – 1—2 минуты. Животные сравнительно легко переносят процедуру чистки. Особей, которые ведут себя во время манипуляций агрессивно, следует исключить из опыта; к наркозу прибегать нежелательно.
Манипуляции по нанесению разработанных паст и плацебо-средств проводят обычно 1 раз в день, ежедневно в течение 4 или 6 недель, в зависимости от методики оценки кариозного индекса. При специальных целях эксперимента (отработка дозы, методики и др.) перечисленные параметры могут быть изменены.
По окончании эксперимента крыс усыпляют эфиром или хлороформом и декапитируют, челюсти вычленяют и фиксируют в 10% растворе нейтрального формалина в течение 24 часов. После этого челюстные блоки промывают водой, очищают от мягких тканей, а зубы – от остатков пищи, отсекают резцы и дистальные участки челюстей. Кариозные поражения зубов определяют визуально (невооруженным глазом, с помощью лупы или микроскопа), оценивают количество и размер видимых кариозных полостей. Ранние стадии кариеса, которые развиваются у животных примерно через 2—3 недели содержания их на кариесогенном рационе, более точно позволяет выявить серебрение. Для этого подготовленные блоки челюстей крыс импрегнируют в течение 5—6 часов 1 -2% раствором азотнокислого серебра. Затем челюсти промывают дистиллированной водой (меняя ее несколько раз) в течение 1—2 часов и высушивают. Из квадрантов челюстей готовят полушлифы, разрезая блок на симметричные половины по продольной оси зубов или сошлифовывая до срединной плоскости, проходящей через центры всех моляров. Для сошлифовывания используют мелкозернистую наждачную бумагу, последующую полировку проводят на толстом стекле или бумаге. Полученные односторонние шлифы квадрантов челюстей с тремя молярами помещают в чашки Петри, на дно которых предварительно наносят слой пластилина, и изучают их с помощью стереоскопического микроскопа МБС-1 или МБС-2 при различных увеличениях. Активность кариозного процесса (индекс глубины гипо- и деминерализации) оценивают по степени проникновения азотнокислого серебра в твердые ткани зубов по 5-балльной системе:
1 балл – проникновение азотнокислого серебра в эмаль не глубже ее середины;
2 балла – проникновение до эмалево-дентинного К соединения;
3 балла – проникновение за пределы эмалево-дентинного соединения, но не более 1/3 толщины дентина;
4 балла – полное прокрашивание эмали и окраска дентина более 1/3, но менее 2/3 его толщины;
5 баллов – проникновение азотнокислого серебра через всю толщину эмали и дентина до полости зуба.
Поскольку кариес зубов локализуется преимущественно в фиссурах и в контактных зонах, то во избежание диагностических ошибок для оценки интенсивности кариеса используются только эти участки (при оценке первого и второго моляров таких участков- 8, а при учете всех трех моляров каждого квадранта – 10). Индексы глубины гипоминерализации эмали и дентина (определенные, как указано выше) заносят на перфокарту, рассчитывают индекс пораженности отдельных пунктов, на основании чего определяют индекс кариозности зубов (ИК) верхних и нижних челюстей или всех моляров крыс. Затем сравнивают статистические показатели каждой группы животных и вычисляют противокариозную эффективность исследуемых зубных паст. Последнюю оценивают по величине редукции индекса кариозности (РИК), которая выражается в процентах (%) и рассчитывается следующим образом:
