Посевы на M.S.A. «Difco» и томатно-молочном агаре инкубируют при 37°С от 48 до 72 часов в анаэробных условиях, на агаре с кровью, желточно-солевым и Эндо – 24 часа в аэробных условиях. На агаре Сабуро посевы инкубируют до 5 суток при 22—24°С. Проводят подсчет колоний и предварительную идентификацию полученных штаммов микроорганизмов по культуральным и морфологическим признакам. Для специальных исследований выделяют чистые штаммы микроорганизмов и проводят дальнейшее изучение качественной характеристики микробных видов.
Наблюдения за возможными изменениями количественного и качественного состава аутофлоры полости рта крыс проводят в динамике: до начала эксперимента (фоновые данные), через 2, 4, 6 и 9 недель.
Общие количественные сдвиги физиологической микробной флоры полости рта животных опытных групп, по сравнению о контрольными, не должны превышать абсолютного числа на 10—15 колоний микроорганизмов. Появление в посевах микроорганизмов, не свойственных здоровой полости рта экспериментальных крыс, таких как золотистый стафилококк с патогенными свойствами, протей и кишечная палочка, является показателем нежелательного воздействия изучаемой зубной пасты на аутофлору полости рта.
Б) Изучение сохранения жизнеспособности бактерий в зубных пастах при хранении Зубные пасты на протяжении 2 лет после выпуска не должны содержать патогенных микроорганизмов и не являться питательной средой для жизнедеятельности бактерий, которые смогут проникнуть в пасты в процессе использования.
Для данного исследования целесообразно применять следующие контрольные штаммы микроорганизмов: Staph, aureus 209, E.coli M-17, Candida albicans, Str. viridans N 1, Вас. subtillis N 720. Отдельные виды микроорганизмов в виде суспензии суточной культуры вносят бактериальной петлей в тубу (после предварительного частичного выдавливания). После этого тубы инкубируют при 37°С, затем содержимое выдавливают в чашку Петри, откуда материал забирают бактериальной петлей и делают посев в соответствующие питательные среды. Результаты расценивают как положительные при полном отсутствии микробного роста.
Исследование эффективности и механизма действия профилактических и лечебных зубных паст. Для создания высокоэффективных паст, обладающих профилактическими и лечебными свойствами, важно изучить механизм их действия, специфическую (лечебную и профилактическую) активность в конкретной композиции зубной пасты. Такие данные позволяют своевременно корректировать композицию зубной пасты и добиться максимальной ее эффективности.
А) Изучение противокариозной эффективности.Ее определяют в экспериментах на животных (белых крысах линии Вистар) с первоначальной массой 40—50 г. Выбор этих животных, общепринятый в современной стоматологии, обусловлен тем, что модель экспериментального кариеса у них легко воспроизводится.
Алиментарную модель воспроизводят кариесогенным рационом Стефана 580, содержащим избыток углеводов.
Кариеспрофилактическую эффективность новой зубной пасты следует сравнить с известными (одним или двумя) аналогами. Для этих целей формируют минимум 2—3 опытных и 1—2 контрольные группы (в одной контрольной группе не применяют пасты – чистый контроль, во второй – используют плацебо). Используют не менее 30 животных в каждой группе. О противокариозной эффективности испытываемой пасты судят по разнице в интенсивности развития кариеса зубов животных опытной и контрольных групп за определенный период времени.
