Результаты теста ДНК-комет. Описание клинического случая (Антакова Л.Н., Котова Ю.А., Шишкина В.В., Анохина Ю.М., Герасимова О.А., Ким О.Л.)
Антакова Л. Н.>1, Котова Ю. А.>1, Шишкина В. В.>1, Анохина Ю. М.>1, Герасимова О. А.>1, Ким О. Л.>2
>1 ФГБОУ ВО «Воронежский государственный медицинский университет имени Н. Н. Бурденко» Минздрава России, г. Воронеж
>2 БУЗ ВО «Воронежская городская поликлиника № 10» Корпус № 6, г. Воронеж
Antakova L. N., Kotova Yu.A., Shishkina V. V., Anokhina Yu.M., Gerasimova O. A., Kim O. L.
RESULTS OF DNA “COMET ASSAY”. CLINICAL CASE REPORT
Метод ДНК-комет – быстрый и чувствительный тест, предназначенный для обнаружения повреждений ДНК.
Цель. Представить анализ теста ДНК-комет с помощью бесплатной программы CometScore, в которой профили «головы» и «хвоста» комет быстро визуализируются с использованием изображений, данные экспортируются в таблицу.
Исследование проводили на базе НИИ экспериментальной биологии и медицины Воронежскогой медицинского университета в рамках НИИ (протокол локального этического комитета № 7 от 19.10.2023). Образец крови исследовали в качестве образца контрольной группы спустя 3 недели после перенесенной COVID-19 инфекции, лабораторно подтвержденной. На момент проведения теста ДНК-комет жалоб не было, общий анализ крови соответствовал норме, индекс массы тела (ИМТ) 24, женщина, 44 года. Анамнез: первые сутки – боль в горле, заложенность носа, температура 37,9 °С градусов, вторые и третьи сутки – субфебрильная температура, слабость, головокружение. Восьмые сутки – заложенность носа, головные боли в лобной области, слабость, головокружение.
Проведение теста ДНК-комет осуществляли по методу https://cyberleninka.ru/article с модификацией. Вместо SYBR Green I применяли окрашивание DAPI (5 мкг/мл PBS; Sigma) в течение 15 секунд, промывали фосфатным буфером. Окрашенные препараты оценивали с использованием флуоресцентного микроскопа ZEISS Axio Imager.А2 с системой документирования изображений, включающей цветную цифровую камеру Camera Axiocam 506 color, а также с использованием программного обеспечения CometScore.
Обнаружено, что интервал изменения «момента хвоста» был больше интервала изменения «момента головы», что соотносится с литературными данными. Средние различия как по «моменту хвоста», так и по «моменту головы» были значительно выше в группе с COVID-19. Для оценки уровня повреждений ДНК использовали параметр %Tail DNA – процент ДНК в хвосте «кометы», который составил 20,166 ± 12,59, что значительно выше литературных данных по здоровому населению.
Заключение. Несмотря на отсутствие клинического проявления постковидного синдрома было обнаружено увеличение % ДНК в хвосте кометы. Фрагментация ДНК может быть основным патологическим механизмом постковидных состояний. Полагают, что фрагментация ДНК возникает вследствие развития оксидативного стресса и атаки молекулы ДНК активными формами кислорода. Параметр %Tail DNA (%TDNA) является одним из надежных показателей оценки степени повреждения ДНК. На основе полученных данных разработаны критерии исключения пациентов, перенесших COVID-19 в запланированные исследования.
